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                  NEWS

                  新聞資訊

                  新品上市 l 熱敏UDG/UNG

                  發布時間:2022-08-09 發布人:
                  文字:

                  熱敏UDG/UNG——高效去除擴增產物氣溶膠污染

                    在核酸檢測、司法鑒定、食品檢測等分子診斷實驗室中,經常使用PCR或環介導等溫擴增 (LAMP) 等技術大量擴增同類樣品,由擴增產物散逸形成的氣溶膠所導致的PCR假陽性問題帶來很大困擾。使用尿嘧啶-DNA糖基化酶 (Uracil-DNA Glycocasylase) 去除擴增產物氣溶膠污染是目前較為安全和有效的方法。

                   

                  UDG作用原理

                    尿嘧啶-DNA糖基化酶 (Uracil-DNA Glycocasylase),簡稱UDG或UNG。該酶特異性識別單鏈或雙鏈DNA鏈上的尿嘧啶堿基 (dU),對RNA無活性,對待檢測的不含尿嘧啶堿基的DNA無影響。因此,在DNA擴增反應體系中加入UDG,可有效防止外來擴增產物的污染。具體原理如下:

                    在DNA擴增反應底物dNTPs中摻入dUTP,擴增的DNA產物中即含有dU。如果反應體系被含有dU的外來擴增產物氣溶膠污染,在擴增反應之前,UDG可在常溫下催化水解外來DNA鏈中的尿嘧啶堿基和脫氧核糖骨架之間的N-糖苷鍵,產生缺堿基 (AP) 位點,然后將UDG失活。在隨后擴增反應的高溫下,含有AP位點的DNA骨架水解斷裂,從而降解了外來擴增產物。而本次新加入的反應模板不含dU,不受UDG影響。

                  愚公百時美——熱敏UDG

                    使用UDG降解外來擴增產物后,在擴增前必須將UDG失活,否則會降解本次擴增產物,影響擴增結果。目前市場上普通UDG產品來源于大腸桿菌等,熱穩定性高,95℃孵育10 min仍可能有殘留活性(數據來源NEB),對后續PCR有潛在影響,更不能用于一步法RT-qPCR和LAMP。
                    愚公生物/百時美新近推出的熱敏UDG (HL-UDG) 來源于冷水生物,對溫度較為敏感,50℃下孵育5min即可完全失活,解決了常規UDG難以熱失活的問題,并且可用于一步法RT-qPCR和LAMP。

                  產品特性:
                  1、50℃下徹底不可逆的失活。
                  2、保持PCR產物的完整性。
                  3、適用于PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、LAMP污染控制。

                   

                  性能展示:

                   1、 熱敏感,50℃徹底不可逆失活  

                  圖1  HL-UDG 在50℃下徹底不可逆失活。A:將1 U的HL-UDG分別在50℃、70℃、95℃條件下孵育10min后與含dU底物25℃下反應。消化的底物電泳條帶無明顯變化。B:該酶50℃ 下5min、10min失活后的熒光值均與不加UDG的熒光值接近。

                   

                   2、 保持PCR產物的完整性  

                   

                  圖2  HL-UDG不影響PCR產物的完整性。A:在PCR體系中加HL-UDG,在37℃下孵育0、1、2、4、6、8h,凝膠電泳結果顯示加或不加HL-UDG,PCR產物條帶無明顯變化。B:在PCR體系中加HL-UDG,37℃下孵育8h的PCR產物測序結果顯示序列完整。

                   

                  3、 兼容qPCR體系&消化徹底  

                  圖3  HL-UDG兼容qPCR體系&消化徹底。A:在模板為不含有dUTP的qPCR體系加入HL-UDG 與不加入的擴增效果一致。B:qPCR體系中加入不同濃度的含dU模板均被徹底消化,不起峰。

                   

                  應用場景:

                  1、 控制PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、LAMP中的擴增產物氣溶膠污染。

                  2、DNA 修復和突變檢測研究。

                  3、提升 PCR 產物的克隆效率。

                  4、提升定點突變的效率。

                  5、蛋白-DNA 相互作用研究。

                   

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